In-vivo Markierung von Zellen zur Untersuchung von Diffusionsprozessen : In-vivo Markierung von Zellen zur Untersuchung von Diffusionsprozessen mithilfe der Bildgebenden Diffusionsmikroskopie (DIFIM)

ISBN-13: 9783838108018 / Niemiecki / Miękka / 2009 / 132 str.

Pia Irena Heinlein

Opis

Diese Arbeit widmet sich der Anwendung der§Bildgebenden Diffusionsmikroskopie (DIFIM) auf§lebende Zellen. Die Methode erlaubt die Detektion von§Intensitätsfluktuationen über einen großen, mehrere§Mikrometer umfassenden Bereich. Sie ermöglicht§zugleich die Diskriminierung des Fluoreszenzsignals§von störender Hintergrundfluoreszenz anhand von§Fluoreszenzlebensdauermessungen. DIFIM wurde§erfolgreich an einem Testsystem in lebenden Zellen§untersucht und unterschiedliche Diffusionszeiten§konnten visualisiert werden. Damit wurde der§Grundstein gelegt, um Wechselwirkungen verschiedener§Proteine innerhalb einer Zelle zu verfolgen.§Zur Demonstration der Anwendbarkeit von DIFIM in der§Biologie wurde der JAK-STATSignalweg genauer§untersucht. Hierfür wurde zunächst die in vivo§Markierung eines Fusionsproteins mit dem sogenannten§SNAP-Tag mit einzelmolekültauglichen,§Rot-Fluoreszierenden Farbstoffen untersucht.§Weiterführend wurden Zellen mit einem Fusionsprotein§aus STAT5b und mCherry, ein Derivat des§Rot-Fluoreszierenden Proteins, transfiziert. Derartig§behandelte Zellen ermöglichten es erstmals,§Unterschiede in Diffusionszeiten in in vivo§DIFIM-Messungen zu beobachten.

O autorze

Dr. Pia Irena Heinlein, geb. SchlüterChemiestudium an der Ruprecht-Karls Universität HeidelbergPromotion unter Professor Dr. Jürgen Wolfrum in der Arbeitsgruppevon Dr. Dirk-Peter Herten.