Charakterisierung des viralen TAP-Inhibitors ICP47 und Entwicklung nicht-radioaktiver Untersuchungsmethoden

ISBN-13: 9783838608815 / Niemiecki / Miękka / 1998 / 96 str.

Lars Neumann

Opis

Diplomarbeit aus dem Jahr 1996 im Fachbereich Chemie - Biochemie, Note: 1,3, Ludwig-Maximilians-Universitat Munchen (Unbekannt), Sprache: Deutsch, Abstract: Inhaltsangabe: Zusammenfassung: Die vorliegende Arbeit befasst sich mit dem Antigenpeptid-Transporter TAP, dem eine Schlusselrolle in der Immunerkennung infizierter oder entarteter Zellen zukommt. So werden Proteinbruchstucke, die mit Hilfe des Proteasomenkomplexes im Zytosol erzeugt werden von TAP in das endoplasmatische Retikulum gepumpt, wo sie mit MHC-Klasse-I Molekulen assemblieren. Nachdem Transport dieses Komplexes auf die Zelloberflache tasten zytotoxische T-Lymphocyten die prasentierten Peptide ab und eliminieren Zellen, die Fragmente von zellfremden Proteinen tragen. Im ersten Teil dieser Studie werden neue, nicht-radioaktive Moglichkeiten zur Untersuchung der Peptid-TAP-Wechselwirkung entwickelt. So werden elektronenmikroskopische Analysen mit Goldkornchen-tragenden Peptiden besprochen und die Nutzung des S-Peptids der Ribonuklease-S oder Luciferin-markierter Peptide diskutiert. Besonders wird auf das Potential von Peptiden eingegangen, die mit Fluoreszenzsonden gekoppelt wurden. So zeigte sich, dass Fluorescein-markierte Peptide sowohl fur die Quantifizierung der Peptidbindung und des Peptidtransports als auch zur Untersuchung der raumlichen Struktur der Peptidbindungstasche hervorragend geeignet sind. Im zweiten Teil wird das Herpes-Simplex-Virus Protein ICP47 charakterisiert, das durch die Inhibierung von TAP die Immunerkennung des Virus und somit die Lyse der infizierten Zelle verhindert. Die Wechselwirkung dieses klinisch hoch-relevanten Immunmodulators mit seinem Zielprotein TAP wird ausfuhrlich kinetisch und thermodynamisch analysiert. Dabei wird auf die Speziesspezifitat verschiedener Herpes-Simplex-Virus Stamme eingegangen. Daruber hinaus werden strukturelle Besonderheiten, die durch eine Membran-ICP47-Wechselwirkung erzeugt werden, theoretisch und CD-spektroskopisch untersucht. Schliesslich