Reinigung des als Fusionsprotein in E. coli exprimierten Wachstumsfaktors

ISBN-13: 9786203658064 / Niemiecki / Miękka / 84 str.

Selvarajan Ethiraj

Opis

Eschericia coli ist ein häufig verwendeter Wirt, da es die Proteinexpression durch seine relative Einfachheit, seine kostengünstige und schnelle Kultivierung mit hoher Dichte, die bekannte Genetik und die große Anzahl kompatibler molekularer Werkzeuge erleichtert. Es wurde beobachtet, dass Affinitätsmarkierungen die Proteinausbeute verbessern, die Proteolyse verhindern und die Löslichkeit in vivo erhöhen. Die Reinigung von His-markierten Proteinen basiert auf der Verwendung eines chelatisierten Metallions als Affinitätsligand. Enterokinasen werden im Allgemeinen zum Verdau von Fusionsproteinen verwendet, da sie das Ziel auf der C-terminalen Seite der Erkennungssequenz spalten, was die vollständige Entfernung von Affinitätsmarkierungssequenzen ermöglicht. Es wurde eine Studie durchgeführt, bei der E. coli-Zellen durch Ultraschallbehandlung lysiert wurden, um lösliches Fusionsprotein zu gewinnen, und dann durch Tangentialflussfiltration (TFF) unter Verwendung eines Flachplattenkassettenmoduls filtriert wurden. Das filtrierte Protein wurde unter Verwendung von Anionenaustauschchromatographie gefolgt von Pseudoaffinitätschromatographie gereinigt. Das Fusionsprotein wurde durch rekombinanten Enterokinase-Verdau gespalten, um den Fusionspartner vom interessierenden Protein zu trennen. Die Gesamtrückgewinnung des gewünschten Proteins betrug 24,7%.

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O autorze

ETHIRAJ, SELVARAJAN Mr.E.SELVARAJAN Derzeit wissenschaftlicher Mitarbeiter an der School of Biosciences & Technology der VIT University in Vellore, Tamil Nadu, Indien. Seine Expertise in der Lebensmittelbiotechnologie. Sein Forschungsschwerpunkt liegt in der laktosefreien Milchproduktion. Nach seinem M.Tech in Biotechnologie (SASTRA University) arbeitete er in BIOZEEN als Trainee, der von DBT, Indien, gesponsert wird.