Optimierung der Produktion und Aufarbeitung von Glucose-6-phosphat Dehydrogenase und Hexokinase aus Bäckerhefe

ISBN-13: 9783838655802 / Niemiecki / Miękka / 2002 / 194 str.

Werner Hora

Opis

Diplomarbeit aus dem Jahr 2002 im Fachbereich Medizin - Biomedizinische Technik, Note: 2,0, Fachhochschule Jena (Medizintechnik), Sprache: Deutsch, Abstract: Inhaltsangabe: Einleitung: Das Ziel dieser Diplomarbeit war es, ein Verfahren zur Herstellung der Enzyme Glucose-6-phosphat Dehydrogenase (G6P-DH) und Hexokinase (HK) aus Backerhefe (Saccharomyces cerevisiae) fur die Anwendung zur Glucoseanalytik innerhalb eines Studentenpraktikums zu optimieren. G6P-DH und HK werden z.B. zur quantitativen Glucosekonzentrationsbestimmung in Kulturbruhen oder zur Ermittlung des Blutzuckergehaltes und des Zuckergehaltes in Lebensmitteln eingesetzt. In dem Studentenpraktikum sollen G6P-DH und HK von den Studierenden selbstandig aus Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) gewonnen werden, um damit den Einkauf dieser Enzyme einzusparen. Die isolierte G6P-DH und HK soll dann zur Glukosekonzentrationsbestimmung in der im folgenden Praktikum benutzten Kulturbruhe eingesetzt werden. Die Messung der Glucosekonzentration einer Zellkultur ist notwendig, um den Substratverbrauch und damit den Substratausbeutekoeffizienten zu ermitteln. Weiterhin soll den Studierenden ein Vefahren zur Herstellung und Aufarbeitung von Enzymen im Rahmen ihrer Ausbildung vermittelt werden. Fur das Praktikum werden Gerate verwendet, die der Fachhochschule Jena bereits zur Verfugung standen. Zu beachten war, dass bei der Optimierung Aufwand und Kosten der Versuche in einem vernunftigen Verhaltnis zu dem Nutzen in Beziehung standen. Um das Verfahren zu optimieren wurde es zunachst mit aus der Literatur oder empirisch gewonnenen Parametern durchgefuhrt. Dann wurde versucht den oder die bottlenecks zu beseitigen. Hierzu wurden nacheinander die Stellen, die den grossten Verlust an Enzym verursachten, optimiert. Dabei durfte jedoch das ideale Kosten-Nutzen-Verhaltnis nicht aus den Augen verloren werden. Vor Beginn der eigentlichen Versuche wurden die Optimierungsrandbedingungen festgelegt. Dies waren zum einen die A