Fluoreszenzfarbstoffe zur Vitalitätsbestimmung von Mikroorganismen

ISBN-13: 9783838612713 / Niemiecki / Miękka / 1999 / 96 str.

Ralf Oltmanns

Opis

Diplomarbeit aus dem Jahr 1996 im Fachbereich Medizin - Biomedizinische Technik, Note: 1,0, Rheinisch-Westfalische Technische Hochschule Aachen (Unbekannt), Sprache: Deutsch, Abstract: Inhaltsangabe: Zusammenfassung: Im Laufe dieser Arbeit wurden aktive und durch Nahrstoffmangel inaktivierte Zellen von Pseudomonas fluorescens in Chemostaten bzw. Schuttelkolben kultiviert. An diesen Bakterienzellen wurden verschiedene Fluoreszenzfarbstoffe auf ihre Eignung als Indikatoren zur Vitalitatsbestimmung untersucht. Die Experimente mit den verschiedenen Fluoreszenzfarbstoffen fuhrten zu den folgenden Ergebnissen. Der AT-spezifische Nucleinsaure-Farbstoff DAPI erwies sich bei einer Konzentration von 20 ug/ml als ein zuverlassiger Nachweis fur die Erfassung der Gesamtzellzahl. DAPI ist zudem ein sensibler Indikator fur die Zellaktivitat und ermoglicht prazise Aussagen uber die Zusammensetzung einer Bakterienpopulation in Hinblick auf ihre Vitalitat. Im Verlauf der Reaktivierungsversuche teilte sich die Gesamtpopulation aller DAPI-gefarbten Zellen in eine DAPIintensiv- und eine DAPIschwach-gefarbte Teilpopulation, die aktive bzw. inaktive Zellen reprasentieren. Eine Aufteilung mit annahernd gleichen Verhaltnissen konnte bei der Untersuchungen der Zellvolumina ermittelt werden. Eine Anfarbung der Zellen durch die Umsetzung des Dehydrogenase-Substratanalogons CTC (1,52 mg/ml) zu seinem konjugierten, fluoreszierenden Formazan erganzte die DAPI-Farbung und untermauerte ihre Ergebnisse, da das Formazan die Mikroorganismen anzeigt, die uber respiratorische Aktivitat verfugen. Auch die Verwendung von 10 ug/ml des Nucleinsaure-Farbstoffes Hoechst 33342 erbrachte bei der Gesamtzellzahlerfassung konsistente und reproduzierbare Ergebnisse, zeigte jedoch im Verlauf von Reaktivierungsversuchen keine signifikanten Unterschiede im Bezug auf die Zellaktivitat. Acridinorange (800 ug/ml), ein unspezifischer Nucleinsaure-Farbstoff mit einem konzentrationsabhangigen rot-grun-Metachroismus, eignet