Methoden in Der Medizinischen Cytogenetik

ISBN-13: 9783642874833 / Niemiecki / Miękka / 2012 / 186 str.

H. G. Schwarzacher; U. Wolf

Opis

Seit der Entdeckung, daB Chromosomenaberrationen die Ursache fiir angeborene Entwicklungsstorungen beim Menschen sein konnen, gelang es in den letzten 10 Jahren, immer mehr Krankheitsbilder cytogene tisch zu charakterisieren. Cytogenetische Methoden sind so zu einem unentbehrlichen Instrument in der klinischen Diagnostik geworden. Die Absicht des vorliegenden Buches ist es, diese viel faltigen Methoden zusammenzustellen und fur den Laboratoriumsgebrauch ubersichtlich zuganglich zu machen. AuBerdem soll die Lektiire auch an offene Probleme der Forschung heranfuhren und dazu an regen, die Methoden nicht nur schematisch nachzu arbeiten, sondem standig experimentell zu variieren und zu erganzen. Auf einem Gebiet, das sich in einer so vielseitigen Entwicklung befindet, haben manche Methoden allerdings einen noch vorlaufigen Charakter, und eine abschlieBende Dbersicht ist nicht immer moglich. Es ist zu hoffen, daB die von dem Buch ausgehenden Anregungen dazu beitragen werden, die Methoden der menschlichen Cytogenetik zu bereichem. Bonn und Freiburg i. Br., im Januar 1970 H. G. Schwarzacher U. Wolf v Mitarbeiterverzeichnis Herausgeber: Professor Dr. HANS GEORG SCHW ARZACHER Anatomisches Institut der Universitat 5300 Bonn NuBallee 10 Privatdozent Dr. ULRICH WOLF Institut fiir Humangenetik und Anthropologie der Universitat 7800 Freiburg i.Br. AlbertstraBe 11 Mitarbeiter: Dr. WOLFGANG GEY U niversitats-Kinderklinik 8000 Miinchen 15 LindwurmstraBe 4 Professor Dr. SUSUMU OHNO Dept. of Biology, City of Hope National Medical Center Duarte, CA 9lO10 /USA Privatdozent Dr. EBERHARD PASSARGE Institut fiir Humangenetik der Universitat 2000 Hamburg 20 MartinistraBe 52 Professor Dr. RUDOLF ARTHUR PFEIFFER Institut fiir Humangenetik der Universitat 4400 Miinsteri. Westf."

Spis treści

Kultivierung von Blut- und Knochenmarkzellen.- 1. Einleitung.- 2. Knochenmark.- 2.1. Gewinnung des Materials.- 2.2. Präparation der Chromosomen aus Zellen in der Mitose oder Prämitose ohne Kultur.- 2.3. Versand von Knochenmarkpunktaten.- 2.4. Bemerkungen zur Herstellung von Chromosomenpräparaten.- 2.5. Langzeitkulturen von Knochenmarkzellen.- 3. Kultur der Zellen des peripheren Blutes.- 3.1. Vollblutkulturen.- 3.2. Kultur von Leukocyten nach Abtrennung der Erythrocyten.- 3.2.1. Abtrennung der Erythrocyten.- 3.2.2. Trennung der mononucleären und polymorphkernigen Leukocyten.- 3.2.3. Wahl des Kulturmediums.- 3.2.4. Zusätze zum Kulturmedium.- 3.2.5. Aufbewahrung der Kulturmedien.- 3.2.6. Kulturdauer.- 3.2.7. Anreicherung der Mitosen.- 3.3. Aufbewahrung und Verschickung von Blutproben.- 3.4. Verfahren bei Leukämien.- 3.5. Langzeitkulturen aus Zellen des peripheren Blutes.- 3.6. Lymphocyten aus Lymphknoten, Thymus und Milz.- 4. Phytohämagglutinin: Eigenschaften und Wirkungsweise.- Anhang: Laboratoriumsvorschriften.- Literatur.- II Zellkulturen aus Gewebsexplantaten.- 1. Allgemeine Bemerkungen.- 1.1. Anwendungsbereiche.- 1.2. Material.- 1.3. Methoden.- 2. Besprechung der Methoden.- 2.1. Techniken der Gewebsentnahme.- 2.2. Ansatz von Gewebsexplantaten und Zellkultur.- 2.2.1. Enzymatische Dissoziation von Gewebsexplantaten.- 2.2.2. Ansatz solider Explantate.- 2.2.2.1. Plasma-Methode.- 2.2.2.2. Ansatz zwischen Deckgläsern („Sandwich“-Methode).- 2.2.2.3. Explantate unter perforiertem Cellophan.- 2.2.3. Kultur im CO2-Brutschrank.- 2.2.4. Sonderfall: Abortusmaterial.- 2.3. Abbrechen der Kulturen zur Chromosomenpräparation.- Anhang I: Übersicht über einzelne Methoden.- Anhang II: Katalog der Reagenzien, Medien und Kulturgefäße.- Literatur.- III Präparation von Mitose-Chromosomen.- 1. Einleitung.- 2. Präparation von Zellsuspensionen.- 2.1. Ausgangsmaterial.- 2.2. Allgemeines zum Präparationsgang.- 2.3. Präparation durch Lufttrocknen.- 2.4. Präparation durch Quetschen.- 3. Direktpräparation von Monolayer-Kulturen.- 4. Färbung.- Anhang: Laboratoriumsanleitungen.- Literatur.- IV Autoradiographie an menschlichen Chromosomen mit 3H-Thymidin.- 1. Einleitung.- 2. Theoretische Grundlagen.- 2.1. Der chemische Aufbau von DNS.- 2.2. Der DNS-Synthese-Cyclus.- 2.3. Der Einbau von Thymidin in die DNS.- 2.4. Tritium-Thymidin.- 2.5. Das autoradiographische Filmmaterial.- 2.5.1. Emulsionen.- 2.5.2. Stripping-Filme.- 3. Techniken.- 3.1. Markierung mit Tritium-Thymidin.- 3.1.1. Kontinuierliche Markierung.- 3.1.2. Puls-Markierung.- 3.2. Aufarbeitung der Kulturen und Herstellen von Chromosomenpräparaten.- 3.3. Die autoradiographische Technik.- 3.3.1. Bedecken der Präparate mit autoradiographischem Filmmaterial.- 3.3.2. Exposition.- 3.3.3. Entwickeln und Fixieren des autoradiographischen Films.- 3.3.4. Färbung.- 3.3.5. Auswerten der Chromosomen-Autoradiographien.- 3.3.6. Herstellen von Kontrollbildern durch Entfernen der Silberkörner und Ablösen des autoradiographischen Films.- 4. Einige Ergebnisse der Markierungsversuche an Chromosomen.- 4.1. Die DNS-Synthese innerhalb einzelner Chromosomen.- 4.2. Verteilung der neusynthetisierten DNS auf die Tochterzellen.- Anhang: Übersicht über das Verfahren.- Literatur.- V Der Karyotyp des Menschen.- 1. Einleitung.- 2. Chromosomen der normalen Metaphase.- 2.1. Untersuchungsmaterial.- 2.2. Lokalisation einzelner Chromosomen.- 2.3. Alterseffekt und Chromosomenzahl.- 2.4. Einflüsse der Zellkultur auf Chromosomenzahl und -struktur.- 3. Der Standardkaryotyp.- 4. Variationen des Karyotyps.- 5. Identifizierung einzelner Chromosomen durch spezielle Methoden.- 5.1. Autoradiographie.- 5.2. Chromosomenmessung.- 6. Erhebung und Auswertung von Befunden.- 6.1. Die Analyse.- 6.2. Diagnose von Chromosomenmosaiken.- 6.3. Analyse von Chromosomenbrüchen.- 6.4. Chromosomenanalyse durch Computer.- 6.5. Archivierung cytogenetischer Daten.- 7. Chicago-Nomenklatur (1966).- Anhang: Tabellen.- 1. Altersabhängiges XO/XX-Mosaik.- 2. Häufigkeit von Chromosomenvarianten.- 3. Definition von Replikationsstadien am Ende der S-Phase.- 4. Diagnose eines Chromosomenmosaiks.- 5. Analyse von Brüchen.- 6. Symbole der Chicago-Nomenklatur.- Literatur.- VI Chromosomen in der Meiose.- 1. Einleitung.- 2. Übersicht über den Ablauf der Meiose beim Menschen.- 3. Präparation meiotischer Prophasefiguren.- 3.1. Männliches Geschlecht.- 3.2. Weibliches Geschlecht.- 4. Präparation meiotischer Metaphasefiguren.- 4.1. Männliches Geschlecht.- 4.2. Weibliches Geschlecht.- 5. Interpretation von Meiosebeobachtungen.- 5.1. Gibt es polyploide Keimzellen ?.- 5.2. Chiasmafrequenz.- 5.3. Vorzeitige Trennung der Homologen.- 5.4. Trivalente.- 5.5. Quadrivalente.- 6. Zusammenfassung.- Literatur.- VII Untersuchung des Sexchromatins.- 1. Einleitung.- 2. Gewinnung des Materials.- 2.1. Allgemeine Bemerkungen.- 2.2. Schleimhautabstriche.- 2.3. Zellisolation-(Zupf-)Präparate.- 2.4. Häutchenpräparate.- 2.5. Gewebekulturen.- 2.6. Schnittpräparate.- 3. Fixierung.- 3.1. Wahl des Fixierungsmittels.- 3.2. Ausstriche, Häutchenpräparate und Monolayerkultur.- 3.3. Isolierte Zellen aus festem Gewebe.- 3.4. Größere Gewebeblöcke.- 4. Färbung.- 5. Auswertung der Präparate.- 5.1. Allgemeine Bemerkungen.- 5.2. Schleimhautabstriche.- 5.3. Gewebekulturen.- 5.4. Häutchenpräparate vom Amnion.- 5.5. Pränatale Geschlechtsbestimmung.- 5.6. Schnittpräparate.- 5.7. Polyploide Zellen.- 5.8. Malignes Gewebe.- Anhang: Laboratoriumsvorschriften.- Literatur.- VIII Sexchromatin-Diagnostik mit Hilfe des Leukocytentests.- 1. Einleitung.- 2. Methodik.- 3. Auswertung.- Literatur.