Bakterientransformation, Minipräparation, Restriktionsanalyse und PCR. Protokolle zum Genetik-Praktikum für Lehramt der Sekundarstufe II: 2.Teil

ISBN-13: 9783638646796 / Niemiecki / Miękka / 2016 / 44 str.

Sabrina Engels

Opis

Fachbuch aus dem Jahr 2002 im Fachbereich Biologie - Genetik / Gentechnologie, Note: sehr gut, Heinrich-Heine-Universitat Dusseldorf (Biologie-Institut), Sprache: Deutsch, Abstract: Das Erbgut hoherer Organismen liegt im Zellkern in Form von Chromosomen vor. Um das Erbgut, die DNA, zu untersuchen und zu charakterisieren muss es isoliert und vom Rest der Zelle getrennt werden. Exemplarisch soll aus einem pflanzlichen (Tomate) und einem tierischen ( Kalbsbries) Organismus die DNA isoliert und sichtbar gemacht werden. Das methodische Prinzip, das diesem Isolierungsverfahren zugrunde liegt, ist auf alle Organismen anwendbar. Das entsprechende Gewebe wird im kalten Zustand gemorsert oder zerkleinert, bis es pulverisiert ist. Zum Aufschluss der Zelle wird das Gewebe einem bestimmtem Puffer zugesetzt. Dieser Puffer sollte zellwandzerstorende Detergenzien wie SDS, welches an Proteine bindet und diese denaturiert und zellwandverdauenden Enzyme wie z.B. die Proteinase K. enthalten. Im Praktikum hat unsere Gruppe Zahnpasta der Marke Ajona benutzt, um den Gewebeaufschluss herbeizufuhren. Nach einer Inkubationszeit erfolgen Reinigungsschritte mit organischen Losungsmitteln, um Zellwandreste, sowie zellulare Proteine zu entfernen. Um dies zu realisieren benutzt man Salze, deren positiv geladenen Ionen die negativ geladenen Phosphatgruppen des DNA-Ruckgrats sattigen und Alkohol wie z.B. Ethanol. Ethanol fallt die DNA (Prazipitation). Ethanol macht die sehr langen, fadenformigen DNA-Molekule wasserunloslich, indem es ihnen die umgebenden Wassermolekule entzieht. Die DNA-Faden lagern sich aneinander oder verknaulen sich und fallen als eine groe, sichtbare Flocke aus. Die DNA befindet sich nun in einem festen Zustand und kann vom Rest der Losung ( Zellbruchstucke, Proteine) getrennt werden. Die gefallte DNA kann darauf in Wasser resuspendiert werden und liegt nun konzentriert vor. Um Informationen uber die DNA zu erlangen, wird diese einer Gelelektrophorese unterzogen. Aus den D